• 熱線電話:010-56107385

聯系方式

地 址:北京市昌平區北清路生命科學園博雅CC -9號樓2層
電 話:010-56107385
傳 真:
郵 箱:support@ori-gene.cn

單細胞全基因組測序

您現在的位置:首頁 > 科研服務 > 基因組服務 > 單細胞全基因組測序

單細胞基因組測序

產品描述信息

      細胞全基因組測序是基于單個細胞水平上采取高質量的全基因組擴增與測序相結合的一項新技術,用于揭示細胞群體差異和細胞進化關系。該技術目前主要應用于腫瘤發生機制及胚胎發育研究。由于腫瘤細胞之間具有異質性,采用該項技術不需培養細胞,可最真實的獲得單克隆癌細胞的具體突變來源及精準的突變頻率,以及區分癌癥發生、發展、演化過程中的主動與被動突變等。
      我公司接受組織、全血、細胞懸浮液或細胞系樣品。分離得到單個細胞,然后抽提細胞中的DNA,采用多重退火環狀循環擴增(MALBAC)技術擴增并且質控。高保真高覆蓋的全基因組擴增技術為后續的信息分析提供最可靠的后盾。

產品詳細信息

1、運用MALBAC擴增技術,解決了基因組擴增對微量初始模板過大的擴增偏倚,使得單細胞中90%的基因組能夠被測序,樣品起始量可低至0.5pg; 

2、通量高:每個樣本30X以上的數據產出量,海量數據用于分析; 

3、覆蓋度高:能夠檢測到大于90%的SNP; 

4、分辨率高:單堿基分辨率; 

5、可檢測到基因組內較大的結構性變異及基因拷貝數變化等,可全面發掘新的和稀有的遺傳變異; 

6、可得到更加全面、可靠的基因變異信息;

7、數據偏差小、高均一性,真實反應樣本基因組信息。

常見的全基因組擴增方法(whole-genomeamplification,WGA)比較如下:

        不同于以往的非線性或指數型擴增方法,MALBAC技術利用特殊引物,使得擴增子的結尾互補而成環,從而很大程度上防止了DNA的指數性擴增,從而解決了基因組擴增對微量初始模板過大的擴增偏倚,并使基因組測序的模板需求量從µg級降至單細胞水平。MALBAC技術原理如下:

取樣要求:做好記錄、避免污染、充分取樣.

     組織樣品必須是在手術切除后立即冷凍保存(液氮或-80℃),保存時間在一年之內;全血(或骨髓)樣品不少于5mL,需用抗凝采血管取樣和抗凝管分裝,并且在-80℃保存;

  細胞懸液或細胞系,需按照細胞凍存的標準操作,使用細胞凍存液梯度降溫保存于液氮或-80℃

      分離的單細胞樣品推薦使用PH7.2-7.41x PBS buffer (不含 Ca2+Mg2+,) 加上1%BSA細胞保存液保存,總體積不超過2 µL,立刻液氮速凍,干冰運輸。

  對于腫瘤樣品所取樣品大小建議為1-2cm3(過大不利于樣品的凍存,過小則不能滿足取樣用量),對難取樣或珍貴的標本,樣品大小至少5mm3

     

     單精子全基因組測序探索染色體重組

     本研究采用MALBAC技術對一名亞洲男性及其99個精子進行單細胞全基因組測序,測序深度分別為70X1X,構建了迄今為止重組定位精度最高的個人遺傳圖譜,揭秘了減數分裂期同源染色體之間的片段交叉重組(crossover)事件,解析了基因起始區重組率低的原因是分子機制而并非自然選擇。單精子基因組測序非常清晰地揭示了交叉重組的分布以及個人水平上重組率的分布規律。

 

         本研究還發現5%的精子(4個)染色體數目發生異常,即染色體組非整倍體。其中S39精子的19號染色體發生了缺失,S65精子的6號染色體發生了二倍化。此前的多項研究表明,染色體數目異常是造成某些先天性出生缺陷的重要原因。這一研究結果將有助于研究人類染色體重組規律,探索先天性出生缺陷的遺傳機理。

[1]Zong CZ, Lu SJ,Chapman AR,XieXS.Genome-Wide Detection of Single Nucleotideand CopyNumber Variations of a Single Human Cell. Science 2012;338(6114):1622-6.

[2] Lu SJ, Zong CZ, Xie XS, et al. ProbingMeiotic Recombination and Aneuploidy of Single Sperm Cells by Whole GenomeSequencing using MALBAC. Science 2012;338(6114):1627-30.

[3] Lu S , et al. Probing Meiotic Recombination and Aneuploidy of Single Sperm Cells by Whole-Genome Sequencing. Science. 2012, 338(6114): 1627-1630.

伊人香蕉综在线|伊人综合在合线|伊人综合在合线9